慢病毒载体
慢病毒载体是在HIV-1病毒基础上发展而来的病毒载体系统，能将目的基因高效地导入人和动物的原代细胞或细胞系中。
慢病毒包装
目前慢病毒的包装广泛使用三质粒表达系统
三质粒表达系统包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。包装质粒表达复制所需的全部反式激活蛋白；包膜蛋白质粒编码病毒的外壳蛋白；转移质粒中含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，并携带目的基因插入位点和标记基因 。通过三质粒共转染 293T 细胞，包装出的慢病毒纯化后滴度可达到109IU/ml。
慢病毒的应用
- 将目的基因转入转染效率低的细胞，如干细胞、原代细胞；
- 构建稳定表达的细胞系
- 将稳定细胞系或目的基因转入动物组织，使目的基因在动物组织内长期表达；
- 基因治疗、转基因、基因敲除等领域的应用于研究
慢病毒的储存与稀释:
- 慢病毒可于-80℃ 保存6个月以上；若储存时间超过6个月，需要重新滴定病毒滴度后使用。
- 分装保存，避免反复冻融：每次冻融约使病毒滴度降低10%左右。
- 病毒的稀释：病毒需要冰浴融解，使用PBS或培养基稀释。稀释后的病毒需尽快用完，可与4℃储存3天左右。
MOI
病毒感染复数，指感染时病毒与细胞的数量比值，即平均每个细胞感染病毒的活性单位数（TU number/cell）。
慢病毒使用安全规范
- 慢病毒虽然属于假型病毒，没有毒性作用，但仍然具有潜在的生物学危险，需要在BSL2级别的生物安全柜内操作。
- 操作病毒时需要穿实验服，戴口罩和手套。
- 操作病毒时小心不要产生气雾或飞溅。当台面有病毒污染时，立即用含1%的SDS 的70%乙醇溶液擦拭。
- 所有接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液等需要用84消毒液或1%SDS 浸泡过夜后才能弃去。
- 用显微镜观察病毒感染后的细胞时，应拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照，拍照完后用70%乙醇擦拭显微镜台。
- 离心时，先用封口膜封口。
- 实验结束后，脱掉手套，用肥皂和水清洗双手。
细胞感染方法概要
- 接种细胞至合适培养板，铺板时细胞的融合度在50%左右，感染时细胞的融合度应达到70%左右。
- 按照MOI换算病毒颗粒数量，感染前观察细胞状态，当细胞状态良好时吸取相应病毒液至细胞培养液中。
- 混匀后放于二氧化碳培养箱（37℃，5%CO2）孵育过夜。
- 换液，在感染后观察细胞状态，根据细胞的状态，最短可以在加病毒4h后更换新鲜培养液，如果细胞状态良好，可按照正常培养条件培养换液。
- 转染 96 小时后观察细胞阳性率。