外泌体(Exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为30-150nm的具有脂质双层膜的微小膜泡,含有丰富的蛋白质、脂类、核酸(mRNA、lncRNA、miRNA、circRNA),表面有特异性蛋白。外泌体广泛的存在于各种体液中,如外周血、 唾液、尿液、腹水、羊水、脑脊液等。
除了在细胞间传递信息外,外泌体的应用领域已涉及到癌症/复杂疾病分子标志物、肿瘤发生发展、肿瘤微环境的研究、药效研究、干细胞研究等。

每年外泌体相关的自然科学基金中标情况都备受关注。这个领域的热度这些年一直在不断攀升。从统计数据来看,今年的外泌体相关的国家自然科学基金中标总计为1.76亿元,较去年1.26亿元增加40%。

外泌体年度中标量

图1. 近十年外泌体相关国自然基金中标量

外泌体年度中标金额

图2. 近十年外泌体相关国自然基金中标金额

然而,实验中分离到外泌体并得到让人满意的粒径电镜结果并不是容易的事!

你希望自己分离出来的外泌体如下图图3、图4吗?

得到下面这样的外泌体粒径、电镜检测结果,确实让你的文章显得出彩!

图3. 外泌体粒径图(GSTM Exosome Isolation Reagent (for serum or plasma))

图4. 外泌体电镜图(GSTM Exosome Isolation Reagent (for serum or plasma))

外泌体最常用的分离手段是超速离心法,是目前应用最为广泛的外泌体分离方法,也是“金标准”。此法虽然操作简单,但是过程比较费时,而且回收率不稳定。超高的离心速度还可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。

另一种外泌体常用的分离手段是沉淀法,也是商品化试剂盒最常用的分离方法。该方法的机理是体积排阻的聚合物通过“劫持”水分子,从而造成外泌体溶解度的降低,进而在低速离心条件下发生沉降。此法容易产生较多的杂蛋白以及聚合物等杂质。

GSTM Exosome Isolation Reagent在沉淀法的基础上增加了纯化蛋白的步骤,大大提高了外泌体的纯度,减少了杂蛋白的污染。使用方便,操作简单,不需要专业设备。并可搭配专门的过滤器,达到高效分离外泌体的目的。

下面是使用吉赛生物GSTM Exosome Isolation Reagent发表的文章:

注:不同型号的电镜所拍的外泌体效果有所不同

一篇优秀的文章并非仅仅分离出质量良好的外泌体就能实现的,吉赛旗下的密码子基因是一家在高通量测序领域有着丰富经验的高新技术企业,对建库难度较大的exosome RNA进行建库测序有诸多成功案例,为外泌体的mRNA,lncRNA,circRNA,miRNA等不同研究提供优质的服务。公司的生物信息学团队由美国加州大学洛杉矶分校医学院测序中心的项目科学家带领,生物信息学底蕴丰富,让外泌体高通量测序及数据分析达到准确、丰富、全面。

生物信息分析内容:

一、长链转录组分析内容

1 原始数据质控检查

2 比对结果质控检查

3 基于基因表达的样品主成分分析

4 差异基因表达及相关通路富集分析

5 circRNA预测及鉴定

6 circRNA差异分析

7 差异circRNA宿主基因的通路富集分析

8 差异circRNA的靶向miRNA预测分析

9 长链非编码RNA差异分析

10 基于基因表达的通路活性分析

11 转录调控活性分析及通路互作分析

12 差异长链非编码RNA的调控基因的通路富集分析

13 circRNA及靶向miRNA网络调控制图

 

二、miRNA分析内容

1 miRNA测序分析

2 原始数据质控检查

3 比对结果质控检查

4 新miRNA预测

5 ncRNA注释(rRNA / tRNA / snRNA / snoRNA / piRNA)

6 基于miRNA表达的样品主成分分析

7 miRNA差异分析

8 差异miRNA靶基因GO功能分析

9 差异miRNA靶基因通路分析

10 差异miRNA与差异表达基因调控分析

11 差异miRNA与差异表达基因网络绘图

您还在为外泌体研究而发愁吗?

我们可以帮助你,带你遨游外泌体研究的广阔天地!

 

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